流動相中含有緩沖鹽時，大的原則是：使用前要過渡，使用后要清洗（清洗包括兩個步驟，一個步驟是用來清洗緩沖鹽，另一個步驟是用來清洗強(qiáng)保留物質(zhì)的），具體請按如下方式保養(yǎng)色譜柱。

用乙腈：水＝10：90（如果是甲醇體系則用甲醇：水＝10：90）以1mL/min流速過渡30min，約7個柱體積（目的是防止緩沖鹽在進(jìn)入柱子時析出）。

步驟1）用乙腈：水＝10：90（或甲醇：水＝10：90）以1mL/min流速反向沖洗 45min，約10個柱體積（目的是洗去緩沖鹽，防止緩沖鹽在色譜柱內(nèi)存留引起使用壽命下降）；

步驟2）再用乙腈：水＝80：10（或甲醇：水＝80：10）1mL/min流速反向沖洗45min，約10個柱體積（目的是洗去分析過程中積累的強(qiáng)保留物質(zhì)，防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱內(nèi)進(jìn)一步積累，影響以后的分析，也防止強(qiáng)保留物質(zhì)的積累導(dǎo)致的柱壓升高），然后色譜柱保存在乙腈：水＝80：10（或甲醇：水＝80：10）中。

推薦先用正己烷-異丙醇（99：1）以 0.5mL/min的流速沖10倍柱體積，再根據(jù)流動相選用極性相近的流動相，相同流速沖10倍柱體積，最后換成流動相。正相使用時，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于還原糖的分析；流動相要*脫氣，并不得含有羰基化合物和過氧化物（質(zhì)量不好的乙mi、四氫呋喃含有少量）。

先用異丙醇以0.5mL/min的流速沖30倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用乙腈沖柱子，在過渡到流動相體系。再換成流動相。反相條件下使用時，要特別注意控制pH值范圍，pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)，流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。最li想的pH范圍在pH2.5~8范圍，建議水相<40%以下使用。

正相條件下，可以直接采用流動相平衡系統(tǒng)，使用后用異丙醇以0.5mL/min流速反向沖洗60min，最后保存在異丙醇中，正向使用。

反相條件下使用，先用異丙醇以0.5mL/min流速過渡60min，再用甲醇或乙腈沖洗色譜柱30min以過渡到反相模式。然后再更換成流動相進(jìn)行平衡如果流動相中有緩沖鹽，使用前用采用流動相同等比例的有機(jī)相和水相進(jìn)行過渡，但水相中不含緩沖鹽。過渡30min后再換成流動相進(jìn)行平衡色譜柱。

1）新柱活化：用異丙醇0.5mL/min流速沖洗4個小時，再純乙腈、70%乙腈水各1mL/min流速各1小時，然后用流動相沖洗至基線平穩(wěn)進(jìn)樣。

2）流動相配置：建議兩項(xiàng)流動相預(yù)混合，并且流動相混合前分別采用水膜和有機(jī)相膜過濾水相和有機(jī)相，然后按照比例配制混合500mL的流動相于同一溶劑瓶中，流動相于同一溶劑瓶中（手動預(yù)混合好），充分搖晃溶劑瓶，使兩項(xiàng)混合均勻，采用超聲脫氣20分鐘，如果有變熱的跡象，放置回到室溫。

將流動相放于儀器上，打開儀器泵，檢測器，在線脫氣機(jī)等電源，設(shè)置：柱溫：45℃，檢測器溫度：40℃，流速：1mL/min，打開RID檢測器參比池，沖洗30min以后，將示差檢測器的循環(huán)按鈕打開，使得流出液從的RECYCLE管路流出（回流管液體流出去20min后），再將回流管放置于流動相瓶子中，進(jìn)行流動相循環(huán)。

3）循環(huán)一晚上以后，第二天將流動相循環(huán)切換至waste流路，關(guān)閉參比池，沖洗樣品池30min以后，基線平穩(wěn)，進(jìn)樣檢測。

4）如果1mg/mL濃度乳糖還是沒有出峰，配置一個濃度為5mg/mL濃度。

注意：晚上循環(huán)時一定是分析樣品的流動相色譜條件設(shè)置。 

Xtimate^® Sugar-Ca，Sugar-H，填料屬于聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物基質(zhì)，磺化強(qiáng)陽離子交換樹脂，在使用過程中首先要避免的情況是流動相試劑污染色譜柱，特別避免使用純有機(jī)溶劑沖洗造成色譜柱填料出現(xiàn)溶脹，改變填料性質(zhì)造成色譜柱分離效果失去。

Sugar-Ca針對藥典測定甘露醇和山梨醇，也可以用測定碳水化合物，各種單糖或聚合糖測定，流動相系統(tǒng)和樣品溶劑基本采用純水體系。

Sugar-H針對藥典中利巴韋林測定，也可以用于測定碳水化合物或有機(jī)酸類物質(zhì)分離，所用流動相是硫酸水溶液pH為2.5左右。使用完后基本上采用流動相低溫4度封存，在封存過程中時間過久也會有所長菌，故封存一段時間（2~3）周最好換新流動相封存，若長期不使用可以在流動相中加入5%乙醇做改善試劑，避免長菌現(xiàn)象。 

當(dāng)主峰峰形有所變化，柱效有所降低時，需要進(jìn)行再生；

Sugar-Ca保護(hù)柱的再生方法與Sugar-Ca分析柱方法一致，根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化，越是天然物（尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品），越需要經(jīng)常地對柱子進(jìn)行再生，因?yàn)樗鼈儠c柱子發(fā)生置換。可以通過注射蔗糖來測試柱子的置換情況。如果蔗糖的峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理: 配制500mL的再生溶液（Ca EDTA 500mg/L Cas:23411-34-9），把柱子流路方向反過來，在85℃以 0.5mL/min的流速沖洗一整夜。再生之后回到正常方向使用。

Sugar-H柱子的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化，越是天然物，（尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品），越需要經(jīng)常地對柱子進(jìn)行再生，因?yàn)樗鼈儠c柱子發(fā)生置換。如果主峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理: 配制 500mL的再生溶液（pH2.5的稀硫酸），把保護(hù)柱和分析柱作為整體將流路方向反過來，在85℃以 0.5mL/min的流速沖洗一整夜。再生之后回到正常方向使用，當(dāng)柱子反沖時很重要的一點(diǎn)是需要保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗，用冷的溶劑將會延緩沖洗的過程。